实验十一DNA的粗提取与鉴定
目的要求
1.了解实验原理。
2.学会DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。
3．通过本实验培养实验操作能力和观察能力。
实验原理
XXX在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的
物质的量浓度为0.14mOl／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在Na
Cl溶液中的DNA析出。
XXX不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一
原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
XXX遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
注意事项
1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速
2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法
实验用具
鸡血细胞液（5～10mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0．1g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol／L和0．015mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；
烧杯（100mL，1个，50mL，500mL，各2个），漏斗，试管（20mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
课时安排一课时
课前准备
制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g／mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血（约180mL），用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。
静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。（也可以用离心机离心2min（转速1000转/分）。用吸管吸去上清液。
板书：（课前写好）
实验十一DNA的粗提取与鉴定
实验原理：
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
XXX在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：
1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。5min
2．溶解DNA：
3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢
4．过滤：取黏稠物
5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3min
6．过滤：取滤液。
7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5min
8．DNA的鉴定：沸水浴5min
教学过程：
引言：上节课我们通过几个验证性实验，证明了DNA是主
要的遗传物质。那么DNA是什么样的物质呢今天我们就通过
实验将它提取出来，进行观察和鉴定。
首先请一位同学说一说实验原理。（答：略）
问：通过预习，你知道选用什么实验材料课前准备是怎样做的（答：鸡血细胞液。制备方法：略。）
问：在制备鸡血细胞液时，所用的柠檬酸钠有什么作用
制备过程中，一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。我们采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。
下面大家在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问
1．要严格按照实验指导的方法步骤去操作。
2．实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作，
3．在DNA的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。
下面在实验进行过程中，要思考每一操作步骤要达到什么目的。
在进行步骤1时，利用搅拌的5分钟做如下提问：
问：为什么要加蒸馏水加入蒸馏水后细胞将会怎样
所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。
这一步骤是这个实验成败的关键，注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法，千万不能太快太猛，防止打碎DNA。
观察滤取出来的黏稠物的颜色。有的同学提取的黏稠物较少，原因可能是在溶解DNA时不充分，也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。
将黏稠物再溶解时一定要充分，多搅拌。以免有DNA损
加入冷酒精时动作要慢。
当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌。至不再增加时，取出吸干上面的水分。仔细观察丝状物呈什么颜色
这些丝状物要用二苯胺鉴定。使用二苯胺时要注意不要接触到药液。进行沸水浴时，在实验室较为通风的地方集体进行。
问：步骤3中加入蒸馏水的目的与步骤1有什么区别
很好。问：步骤7为什么要加50mL的冷酒精
现在大家从水浴锅中拿出试管，比较两个试管中溶液的颜色有什么不同（答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色。
）
问：这一鉴定结果说明什么问题
那么你看到的丝状物的粗细是不是DNA分子的直径呢
下面请同学们将实验用具，按原样摆放整齐，实验桌要保持清洁。课下将实验报告册填好。
今天我们通过实验将DNA提取出来进行了观察和鉴定，那
么DNA的化学组成，分子结构和复制是怎样的我们下节课再
继续研究。
间隔时间比较长，如果单纯是鉴定笔迹形成时间的话，可以；如果是鉴定笔迹真假，责一般不能以现在的作为参照。
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